口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he
本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng)，特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he
yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）
口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he
目錄號：40310
目錄編號 | 包裝單位 |
40310-50 | 50次 |
v 適用范圍：
適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。
v 試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：
v 試劑盒組成 | 保存 | 50次 |
裂解液ML | 室溫 | 20 ml |
結(jié)合液CB | 室溫 | 20 ml |
抑制物去除液IR | 室溫 | 25 ml |
漂洗液WB | 室溫 | 15ml 第一次使用前按說明加指ding量乙醇 |
Acryl Carrier | -20℃ | 200μl |
洗脫緩沖液EB | 室溫 | 15 ml |
蛋白酶K fen（可選） 20mg/ml | -20℃ | 20 mg |
吸附柱AC和收集管 | 室溫 | 50套 |
本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影響使用效果
儲存事項(xiàng)：
1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 為避免降低活性，方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解。因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存，－20℃保存。
3. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
v 產(chǎn)品介紹：
本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng)，特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的DNA無雜質(zhì)和PCR抑制劑，可直接適用于PCR分析。
v 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2. 節(jié)省時(shí)間，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成。
3. 配備了Acryl Carrier 用于充分收集特別微量DNA。
4. 多次柱漂洗確保高純度，提取的DNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。
v 注意事項(xiàng)：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到特定溫度備用。
3. 結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. Acryl Carrier：
1) Acryl Carrier 使用方法：如果起始處理量很少（口腔yan拭子上收集到的細(xì)胞很少），我們推薦使用Acryl Carrier，如果預(yù)期有較大量DNA產(chǎn)量，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入Acryl Carrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier，將結(jié)合液CB 與Acryl Carrier溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液CB容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的結(jié)合液CB中加入總共需要的Acryl Carrier混勻備用。混合液在室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
v 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇，充分混勻，加入后請及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進(jìn)口腔，緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20次（不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒），需充分接觸口腔粘膜。
注意事項(xiàng)：避免用手觸及棉簽，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染，取樣前30分鐘內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。
1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入2ml 離心管中，加入400μl裂解液ML。
2. 再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，56℃放置1小時(shí)，期間每10分鐘渦旋混勻10秒。
3. 加入400μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。
如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少，導(dǎo)致提取的基因組DNA產(chǎn)量過低, 可以在400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier 。
4. 冷卻后加200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴，收集所有的液體到管底。
如果周圍環(huán)境高于25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入。
5. 將上一步混合物加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。
棉簽的棉花可能還吸附一些液體，如果要提高產(chǎn)量，可以用干凈鑷子夾擠出液體后棄棉花，減少棉花上液體殘留。
6. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。
7. 加入500μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
9. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10. 取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加20－50μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于20μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
11. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在－20℃。
v 問題與解決方法：
問題 | 評論與建議 |
DNA產(chǎn)量低或者洗 脫液中無DNA | Acryl Carrier沒有加入到結(jié)合液CB-建議：仔細(xì)閱讀注意事項(xiàng)4。 *樣品凍融超過1次-建議：盡量使用新鮮樣品和凍融不超過1次的樣品。 *樣品在室溫放置過久-建議：盡快處理樣品或者低溫適當(dāng)方式保存。 *裂解不wan全，蛋白酶K失效了-建議：收到蛋白酶K后，按照每次使用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 *結(jié)合液CB和Acryl Carrier沒有充分混勻-建議：充分渦旋混勻。 *試劑和樣品沒有充分混勻-建議：加入每個(gè)試劑后都要充分混勻。 *洗脫效率不高-建議：確保做了步驟9，否則殘留乙醇會影響洗脫效率，仔細(xì)閱讀步驟13和只使用洗脫緩沖液EB洗脫。 |
DNA的下游反應(yīng)如 PCR效果不佳 | * DNA產(chǎn)量低或者洗脫液中無DNA-建議：在下游反應(yīng)中增加DNA用量。 * 降低的靈敏度-建議：確定在下游PCR應(yīng)用中DNA洗脫液的最大允許用量，減少或者增加DNA洗脫液在PCR反應(yīng)中的用量，DNA洗脫體積也可以相應(yīng)的調(diào)整。 |
DNA下游酶切 | * 離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反應(yīng)-建議：確保做了步驟9，然后空氣中晾幾分鐘，讓殘留乙醇揮發(fā)。 * 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來，抑制了酶切反應(yīng)-建議：將洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘，小心取上清使用。 |
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